Les ouvrières sont des abeilles femelles qui naissent d'un oeuf de reine fécondé. Leur appareil génital est atrophié, elles ne sont pas censées pondre, mais dans le cas où il n'y a pas de reine pendant une longue période, certaines ouvriéres se mettent à pondre. Leurs oeufs non fécondés n'engendreront que des abeilles mâles (faux-bourdons) et la ruche deviendra alors "bourdoneuse" ce qui conduira à sa disparition.
Au sein d'une colonie, les ouvriéres ne sont pas toutes aparentées, la reine étant fécondée par plusieurs mâles. Elles possédent néanmoins des caractéristiques morphologiques similaires : une langue trés dévelopée pour récolter le nectar, des pattes arriéres adaptées au transport du pollen, des plaques ciriéres pour la construction des rayons et un aiguillon pour la défense de la ruche. Cette aiguilllon est lisse chez la reine mais barbelé chez l'ouvrière. En cas d'attaque, l'abeille qui pique laisse son dard dans la peau, déchirant son abdomen et entrainant sa mort. Le dard est relié à une poche à venin qui se vide dans les 10minutes suivant la piqûre. Il faut donc l'enlever délicatement de la peau sans appuyer sur cette poche.
Les ouvrières représentent la majeure partie de la population d'une ruche et tiennent plusieurs rôles succesif selon leur âge :